- 申请人:佛山科学技术学院
- 申请日: 2011年10月12日
- 主分类号: C12N5/0735
- 公开号:102329771A
- 公开日: 2012年01月25日
摘要: 长期传代培养鸡胚胎干细胞的方法及其专用培养基,其特征在于分离期胚盘明区的细胞,经机械吹打分散成单个细胞或小细胞团后,接种于STO饲养层,用上述鸡胚胎干细胞在专用培养基及37~38℃环境下培养,3~5天传代一次,专用培养基包括条件培养液600-900mL;胎牛血清50-150mL;鸡血清5-20mL;非必需氨基酸中的一种或几种混合物5-25mL;L-谷氨酰胺0.146-0.292g;β-巯基乙醇6-14μL;小鼠白血病抑制因子1—2×106IU;碱性成纤维细胞生长因子10-50μg;干细胞生长因子5-20μg,将上述成分用DMEM高糖培养基定容至1000mL,调pH值为7.2-7.5,条件培养液是这样获得的,培养BRL-3A细胞至细胞汇合后,收集培养细胞的上清液,离心分离后再经滤膜过滤所得即为条件培养液。本发明与已有技术相比,具有可以实现鸡胚胎干细胞的长期传代培养,并具有细胞增殖快、克隆获得率高的优点。